猪繁殖与呼吸综合征病理组织学观察

摘　要：采集患有猪繁殖与呼吸综合征的病死猪肺脏、肝脏、脾脏和淋巴结，经固定、脱水、透明、浸蜡、切片、HE染色，在光学显微镜下观察以上各脏器的病理变化。结果表明，各脏器主要病理变化是出血和淤血；肺脏的细支气管萎缩，肺泡壁上皮巨噬细胞增生；肝脏有颗粒变性，脾脏白髓周围有“红晕”；淋巴结淋巴中心细胞坏死。关键词：猪繁殖与呼吸综合征；病理组织学；观察猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV)引起的以成年母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状及断奶仔猪高病死率为特征的病毒性传染病之一[1]，临床见症状主要表现为妊娠母猪妊娠后期流产、死产、弱仔明显增多、分娩率下降及断奶仔猪的肺炎，生长迟缓，且常伴发细菌混合感染；吮乳仔猪和断奶仔猪出现严重的呼吸道症状[2]。本试验通过对采集的病料进行病理组织切片的制作，然后在光学显微镜下观察机体在患病状态下组织结构和形态的变化，并结合临床症状和对猪繁殖与呼吸综合征病理组织学变化进行描述，为进一步研究其发病机理奠定基础。1　材料与方法1.1　材料患有猪繁殖与呼吸综合征的莱阳某猪场的病死猪，采集肝脏、肺脏、脾脏和淋巴结。病毒的分离鉴定按文献[3]进行。1.2　主要试剂和仪器100mL/L中性福尔马林溶液，梯度乙醇，二甲苯，HE染色液；生物病理切片机QPJ­1B(天津天利航空机电有限公司)，高级切片石蜡(熔点为54℃～56℃，上海华永石蜡有限公司)，电热恒温水浴槽(上海医用器械三厂)，载玻片(盐都县腾达塑玻制品厂)，六联电子调温万用电炉(龙口市先科仪器公司)，电热恒温箱(龙口先科仪器公司)，光学显微镜OLYMPUSCH­2，奥林巴斯数码相机(日本奥林巴斯集团)。1.3　方法剖检病猪并，集肝脏、肺脏、脾脏和淋巴结，切成厚度大约为5mm组织块，用100mL/L的中性福尔马林固定，固定24h后，经过流水冲洗，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片(厚度6μm)，HE染色，光学显微镜下观察。2　结果2.1　临床症状临床发现少数病猪可见耳朵、腹部、腿部紫绀，咳嗽，食欲减退或废绝。病死猪外观尸僵完全，皮肤色淡似蜡黄，鼻孔有带血泡沫。剖检发现皮下脂肪较黄，稍微有水肿。肺脏病变呈间质性肺炎症状，有的肺脏呈灰褐色，肺尖叶、中叶和后叶病变无明显差异；肝脏有的萎缩，有的轻度肿胀，色褐质脆，个别有灰白样坏死；脾脏肿大，呈紫黑色半透明的出血病变。2.2　病理组织学观察2.2.1　肝脏　肝细胞普遍发生变性，坏死，核溶解，呈蜂窝状，肝窦扩大，并有淤血。肝汇管区有少量组织细胞浸润以及成纤维细胞增生。汇管区附近或中央静脉周围见部分肝细胞发生变性(图1A)。2.2.2　肺脏　主要表现为局灶性支气管炎，见支气管黏膜上皮脱落进入管腔，支气管周边有组织细胞浸润以及成纤维细胞增生，这可能是导致仔猪呼吸障碍的直接原因。肺泡壁细胞肿胀，变圆，巨噬细胞数量增多，附近其他区域可见肺泡气肿，几个肺泡互相融合(图1B)。2.2.3　脾脏　脾脏光镜下观察可见脾组织失去正常固有组织，脾小体的结构不完整或消失，并且脾小体周围有“红晕”。脾脏毛细血管扩张充血，脾小体内有弥散性出血细胞，并且有纤维素性微血栓。脾脏中央动脉周围淋巴鞘内的T淋巴细胞增多，脾窦内有中性粒细胞和巨噬细胞浸润(图1C)。2.2.4　淋巴结　淋巴小结的结构不完整，发生中心形成不完全，淋巴结外膜出血。生发中心轻微出血，淋巴中心细胞坏死；毛细血管后微静脉有少量淤血，淋巴小结内的B淋巴细胞减少，呈弥散分布3　讨论PRRSV首要侵害的器官是肺脏，肺脏大量的巨噬细胞被破坏，因此在肺脏的病理组织切片中有许多脱落的巨噬细胞。试验所观察到的肺脏的病理变化与GloriaSM[4]报道的PRRSV感染猪后2h猪的肺泡巨噬细胞吞噬能力增强，而在感染后7d肺泡巨噬细胞的吞噬能力明显减弱，从而引起免疫抑制相吻合。淋巴结和脾脏都是机体的外周免疫器官，是成熟的T细胞和B细胞栖居、增殖和对抗原刺激产生免疫应答的场所，脾脏的脾小体结构不完整，被出血的红细胞所覆盖，脾小体内的B淋巴细胞减少，中央动脉周围淋巴鞘内的T淋巴细胞增多，淋巴小结的结构不明显，小结内的B淋巴细胞数量减少，且呈弥散性分布，副皮质区增宽，说明T淋巴细胞数目增多。由此可知，PRRSV可能影响机体的细胞免疫，这恰好验证了PRRSV能引起免疫抑制[5]的结论。本病的主要病理变化在肺脏，因此应该首先取肺脏，脏器的上皮组织易变质，应争取在死后30min内处理完毕。组织块力求小而薄，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织块内部。切取组织块用的刀具要锋利，切割时不可来回挫动。熟悉某些器官的组成，然后决定其切面的走向。切除不需要的部分，尤其是组织的脂肪滴等，应尽可能清除掉。制片过程中对肺脏进行抽气[6]处理，能使肺脏达到良好的固定效果和切片效果。在切片及染色过程中，切片的厚度直接影响观察效果，切片太厚，细胞重叠，细胞病变观察不明显[7]；切片太薄容易破碎，做不出完整的切片。脱水、透明的时间要严格掌握，脱水和固定时间过长都会使组织块收缩而不利于进行切片。染色时，苏木素染色时间应在15min左右，时间过长则染色过深，不利于观察病变[8]；在10mL/L盐酸乙醇和碳酸锂饱和溶液里所待的时间分别是5s和30s。染色的时间的掌握应严格控制，否则将直接影响切片的质量。