改进饱和盐水漂浮法诊断兔球虫病

时间:2022-05-28 编辑:Bertha
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球虫病是家兔常见的寄生性原虫病,主要由艾美尔属球虫所引起的,各种年龄的家兔都有易感性,4~5月龄幼兔感染率可达100%,球虫病导致幼兔生长发育受阻,甚至大批死亡,本病常呈地方性流行。由于球虫的种类和寄生部位的不同,可以分为肝球虫病和肠球虫病;但混合感染最为常见。据我国学者报道,全国已发现16种兔艾美尔球虫。从1997~2005年中,我们在临床上数百次改进饱和盐水浮集法,尽量缩短诊断时间、提高检出率,在256例球虫病检测中,诊断准确率达90%以上,为养兔业提供了很好的技术方法。1材料和方法1.1制备饱和食盐溶液将蒸馏水边加热边加入NaCI,直至不再溶解生成沉淀为止(1000mL水中约加入NaCl370g)。用滤纸(型号为中速202)过滤,冷却(NaCI略有析出)后使用。1.2取粪便将剖检的病兔尸体平放,提出胃、肠部分平放在方盘内,取十二直肠或盲肠内的粪便(粪便内最好略带血且不要过稀)5g放入容量为50~60mL的宽口瓶或量筒中备用。1.3卵囊富集方法1.3.1在盛有粪便的宽口瓶或量筒中加入少量的饱和食盐溶液(一般为容器容量的1/2为宜),用玻璃棒压碎且搅拌混匀,搅拌时注意不要溅出。搅拌好后将宽口瓶或量筒静置40min左右。1.3.2用四层纱布将静置好的液体过滤入另一宽口瓶或量筒中,弃去粪渣,继续注入饱和食盐溶液至瓶口,要使瓶口液面凸起,但又不会溢出,静置1.5小时左右。1.3.3用层纱布将静置好的液体过滤图另一宽瓶口上,使载玻片底面与瓶内的液面相接触,勿使有空隙;然后将载玻片轻而快地自瓶口向上提起,同时迅速翻转,使液面向上,勿使液体流落:取一盖玻片,均匀地压在载玻片上,使盖玻片与液体充分接触,不要出现气泡。2镜检将载玻片置于10X10倍的光镜下,调整显微镜,使视野清晰,并且光亮不必太强。调好视野后,可随意滑动载玻片的位置,仔细观察是否有球虫卵囊。显微镜下观察球虫卵囊呈橄榄形,有枣核般大小,卵囊壁有的厚有的薄,一般光滑而均匀一致。由于球虫种类不同,所以卵囊的形态(包括长卵圆形、长圆形、卵圆形、梨形、长椭圆形、宽卵圆形、筒形)和颜色(淡黄、无色、橙黄、淡绿、淡灰)略有差异。3讨论和小结3.1本诊断方法与普通的饱和盐水漂浮法原理一致,都是采用比卵囊密度大的溶液浸泡粪便,使卵囊上浮于液体表层。但是本诊断方法更为简单。对于实验条件、实验设备以及实验操作的要求也不高,并且只要实验操作无误,发现卵囊的机会很高。非常适合基层兽医人员诊断兔球虫病。3.2在配制饱和食盐溶液时,要注意食盐量不要加的过多,只要按照比例加入,不再析出即可。如果盐量过多,在第二次静置时就会析出大量食盐结晶,影响触片效果。3.3在用载玻片接触液面时,用力不要过大,并且要一次成功,因为静置后所有的球虫卵囊都会漂浮在液面上,经过一次接触,球虫卵囊大部分已经粘附在载玻片上,液面已所剩无几。3.4在向载玻片上压盖玻片时,用力要轻,要从载玻片的一侧倾斜着压向另一侧,此时动作要迅速,一定要使盖玻片和载玻片间没有气泡。如果出现气泡,若观察不仔细有时会误将气泡视作球虫卵囊,影响镜检结果。3.5在使用光镜观察时,光亮的强度一定要小,要使镜下形成一个暗视野。因为球虫卵囊并不是一个实心的椭圆体,而是空泡状颜色略暗的椭圆体,若光亮太强,有时反而观察不到球虫卵囊。
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