改进饱和盐水漂浮法诊断兔球虫病

球虫病是家兔常见的寄生性原虫病，主要由艾美尔属球虫所引起的，各种年龄的家兔都有易感性，4～5月龄幼兔感染率可达100%，球虫病导致幼兔生长发育受阻，甚至大批死亡，本病常呈地方性流行。由于球虫的种类和寄生部位的不同，可以分为肝球虫病和肠球虫病；但混合感染最为常见。据我国学者报道，全国已发现16种兔艾美尔球虫。从1997～2005年中，我们在临床上数百次改进饱和盐水浮集法，尽量缩短诊断时间、提高检出率，在256例球虫病检测中，诊断准确率达90%以上，为养兔业提供了很好的技术方法。1材料和方法1.1制备饱和食盐溶液将蒸馏水边加热边加入NaCI，直至不再溶解生成沉淀为止（1000mL水中约加入NaCl370g）。用滤纸（型号为中速202）过滤，冷却（NaCI略有析出）后使用。1.2取粪便将剖检的病兔尸体平放，提出胃、肠部分平放在方盘内，取十二直肠或盲肠内的粪便（粪便内最好略带血且不要过稀）5g放入容量为50～60mL的宽口瓶或量筒中备用。1.3卵囊富集方法1.3.1在盛有粪便的宽口瓶或量筒中加入少量的饱和食盐溶液（一般为容器容量的1/2为宜），用玻璃棒压碎且搅拌混匀，搅拌时注意不要溅出。搅拌好后将宽口瓶或量筒静置40min左右。1.3.2用四层纱布将静置好的液体过滤入另一宽口瓶或量筒中，弃去粪渣，继续注入饱和食盐溶液至瓶口，要使瓶口液面凸起，但又不会溢出，静置1.5小时左右。1.3.3用层纱布将静置好的液体过滤图另一宽瓶口上，使载玻片底面与瓶内的液面相接触，勿使有空隙；然后将载玻片轻而快地自瓶口向上提起，同时迅速翻转，使液面向上，勿使液体流落：取一盖玻片，均匀地压在载玻片上，使盖玻片与液体充分接触，不要出现气泡。2镜检将载玻片置于10X10倍的光镜下，调整显微镜，使视野清晰，并且光亮不必太强。调好视野后，可随意滑动载玻片的位置，仔细观察是否有球虫卵囊。显微镜下观察球虫卵囊呈橄榄形，有枣核般大小，卵囊壁有的厚有的薄，一般光滑而均匀一致。由于球虫种类不同，所以卵囊的形态（包括长卵圆形、长圆形、卵圆形、梨形、长椭圆形、宽卵圆形、筒形）和颜色（淡黄、无色、橙黄、淡绿、淡灰）略有差异。3讨论和小结3.1本诊断方法与普通的饱和盐水漂浮法原理一致，都是采用比卵囊密度大的溶液浸泡粪便，使卵囊上浮于液体表层。但是本诊断方法更为简单。对于实验条件、实验设备以及实验操作的要求也不高，并且只要实验操作无误，发现卵囊的机会很高。非常适合基层兽医人员诊断兔球虫病。3.2在配制饱和食盐溶液时，要注意食盐量不要加的过多，只要按照比例加入，不再析出即可。如果盐量过多，在第二次静置时就会析出大量食盐结晶，影响触片效果。3.3在用载玻片接触液面时，用力不要过大，并且要一次成功，因为静置后所有的球虫卵囊都会漂浮在液面上，经过一次接触，球虫卵囊大部分已经粘附在载玻片上，液面已所剩无几。3.4在向载玻片上压盖玻片时，用力要轻，要从载玻片的一侧倾斜着压向另一侧，此时动作要迅速，一定要使盖玻片和载玻片间没有气泡。如果出现气泡，若观察不仔细有时会误将气泡视作球虫卵囊，影响镜检结果。3.5在使用光镜观察时，光亮的强度一定要小，要使镜下形成一个暗视野。因为球虫卵囊并不是一个实心的椭圆体，而是空泡状颜色略暗的椭圆体，若光亮太强，有时反而观察不到球虫卵囊。