金鱼也称金鲫鱼,是由鲫鱼演化而来的水族观赏鱼中的重要品种之一。金鱼品种繁多,色彩丰富、观赏价值高,容易饲养,因而深受广大观赏鱼爱好者的喜爱。与常规养殖鱼类一样,金鱼在大面积苗种培育、水族箱养殖过程中,会有各种传染性或侵袭性疾病的发生,患病金鱼体色和形态也会发生改变,降低其观赏价值,同时给养殖者带来一定的经济损失。目前使用水产药物是防治金鱼疾病最常用的方法,但水产药物的使用不可避免地会对金鱼产生毒性作用,急性毒性试验是药物安全性评价的基础试验,它以受试动物的死亡率为试验指标,以求得药物对受试动物的半数致死质量浓度(LC50)和安全质量浓度(SC)为常规目的。不同品种不同规格的鱼类对水产药物的敏感性不同,很多研究者对水产常用药物对鱼类的毒性试验进行过报道,而目前有关金鱼的急性毒性研究仅有涉及到大规格鱼种的少量报道。苗种培育是金鱼繁育中的关键环节,金鱼苗种体质弱,对外界环境抵抗力差,往往由于水质不佳或者敌害生物的存在而导致其大批量死亡。强氯精、二氧化氯是水产养殖中常用的消毒剂,可以杀灭水体中的各种病原微生物,戊二醛和亚甲基蓝是防治水霉病和杀灭一些小型寄生虫的常用药物,高锰酸钾常用于防治细菌性疾病和杀灭一些寄生虫,氯氰菊酯是一种高效的杀虫剂。本试验以体长1.4~40px的金鱼稚鱼为研究对象,选择以上6种常用水产药物进行急性毒性试验,旨在为金鱼及相关观赏鱼苗种培育阶段的疾病防治和安全用药提供参考。
1 材料和方法1.1 供试鱼
供试金鱼取自新乡市郊区某金鱼养殖场,为同批次繁殖、同池饲养的稚鱼,体长1.4~40px,试验前将金鱼苗暂养在水族箱中,适应性驯养1周。挑选规格一致,反应灵敏,无病无伤的鱼苗进行试验。
1.2 供试药物
二氧化氯(有效质量分数8%,粉剂,北京华龙星宇科技发展有限公司)、水产用戊二醛(有效质量分数20%,液体,黄石农人药业有限公司)、氯氰菊酯(有效质量分数4.5%,乳剂,湖北潜江市渔药厂)、高锰酸钾(分析纯,北京化学试剂三厂)、亚甲基蓝(化学纯,山东滕州银丰化工有限公司)、强氯精(有效氯含量50%,粉剂,江苏武进养康生物科技有限公司)。试验前预先用蒸馏水将试验药物配制成一定质量浓度的母液,再根据需要稀释成合适的质量浓度。
1.3 试验条件
所有试验均在实验室内进行,使用常温静水试验法,试验用水为经过曝气24h以上的自来水,pH 值为7.1±0.1,试验期间水温为(24±2)℃,试验容器为750px×1000px×500px的塑料水族箱,为防止试验期间材料鱼跳出,箱上加盖网布,试验期间不投饵。
1.4 试验方法
首先根据鱼病防治的药物常用剂量,适当扩大或减小药物质量浓度进行预备试验,观察鱼苗反应及存活情况,根据预备试验的结果,在使金鱼苗全部存活(死亡率为0)的最高质量浓度和全部致死(死亡率为100%)的最低质量浓度之间,按等对数间距设计5个质量浓度,同时设1个空白对照组,每个质量浓度组设3个平行。各种药物设置的质量浓度梯度详见表1。
分别将试验药物的母液按比例稀释成所需质量浓度,将供试鱼按照从低到高的质量浓度逐个放入,每组对应的容器内各随机放入鱼苗20尾。试验开始后,先做8h连续观察,观察其反应和中毒症状,然后分别记录24h、48h和96h时在不同质量浓度药物胁迫下供试鱼的死亡数量。判断死亡的标准是用镊子夹供试鱼的尾部,如无反应,即认为鱼已经死亡,及时捞出死鱼。为保证试验药物的有效质量浓度,每隔24h更换1次药液。试验结束后,根据试验数据,计算出不同时间药物对金鱼苗的半致死质量浓度和安全质量浓度。
1.5 半致死浓度和安全浓度的计算
根据不同时间段供试鱼的死亡率,用直线内插法求出24h、48h和96h的LC50。SC按照以下公式计算:
SC = LC50(48h)×0.3/(LC50(24h)/LC50(48h))2。